服務(wù)介紹：

        超氧陰離子自由基檢測試劑盒(磺胺比色法)又稱超氧陰離子產(chǎn)生速率檢測試劑盒，其檢測原理是在酸性條件下，2份O₂^-與羥胺反應(yīng)生成1份NO₂^-，NO₂^-在對氨基苯磺酸和萘胺的作用下反應(yīng)生成粉紅色的偶氮物質(zhì)，以分光光度計測定530nm處吸光度，在一定范圍內(nèi)顏色深淺與O₂^-成正比，根據(jù)A₅₃₀及NO₂^-和O₂^-的相關(guān)反應(yīng)中物質(zhì)的量的關(guān)系，可算出樣品中O₂^-的濃度，主要用于測定植物組織中的超氧陰離子自由基含量或超氧陰離子的產(chǎn)生速率及清除能力。

 實驗流程：

1、 準備樣品：

①植物樣品：取正?；蚰婢诚碌男迈r植物組織，清洗干凈，擦干，切碎，迅速稱取1~1.5g，加入2ml預(yù)冷的O₂^- Lysis Buffer后冰浴條件下勻漿或研磨，4℃ 10000g離心10min，上清液即為超氧陰離子自由基提取液，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可直接用于該試劑盒的測定

③高活性樣品：如果樣品中含有較高濃度的超氧陰離子自由基，可以使用O₂^- Lysis Buffer進行恰當?shù)南♂尅?/span>

2、 配制系列NO₂^-標準溶液：以NO₂^-標準(1mM)按下表繼續(xù)稀釋：

      3、 O₂^-加樣：按照下表設(shè)置空白管、標準管、測定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入

        4、O₂^-測定：以空白調(diào)零，比色杯光徑1cm，分光光度計測定標準管、測定管530nm處吸光度(即為A_標準、A_測定)。

實驗結(jié)果：

全自動生化儀檢測后導出結(jié)果，結(jié)果由EXCEL形式發(fā)送。

送樣運輸要求：

1、動植物組織樣本(干冰運輸)

準確稱取動物組織重量按重量(mg)：體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水)，冰水浴條件下，機械勻漿，制備成10%的勻漿液，2500~3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘，取上清液進行測定。

2、血清樣本(干冰運輸)

全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜（GLU檢測請勿全血樣本放置過夜取血清）后于2-8℃ 3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進行分裝，并將標本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測。

3、血漿樣本(干冰運輸)

可用肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進行分裝，并將標本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測。

4、細胞樣本

貼壁細胞：將細胞用PBS沖洗2次后，用細胞刮將細胞小心刮下來，將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細胞沉淀，干冰運輸。

懸浮細胞：將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細胞沉淀，干冰運輸。

細胞上清：標本于2-8℃，3000轉(zhuǎn)/分離心15min取上清，上清立即用于實驗，或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復凍融。

僅供科研用途，不可用于臨床診斷！